Journal of Applied Phycology (IF=3.215) 2022-03-07

深圳大学生命与海洋科学学院 胡章立课题组

由于缺乏稳定的转化系统，所以对雨生红球藻进行基因操作比较困难。本研究通过Ble作为抗性筛选基因和EGFP作为报告基因的pH124-EGFP-Ble载体，构建了雨生红球藻有效的转化体系。利用纤维素酶和离析酶处理藻细胞获得原生质体，将原生质体与载体孵育，通过聚乙二醇（PEG）介导进行转化。结果表明，Ble和EGFP整合到阳性转化藻株的基因组并稳定表达。为了提高雨生红球藻原生质体的转化效率，我们对抗生素浓度、藻细胞生长状态、载体总量、载体线性化和低强度光照持续时间等影响因素进行了优化。最终，PEG介导雨生红球藻原生质体转化的最佳条件被确定为5µg的线性化载体，转化对数生长阶段的藻细胞，转化后的原生质体在低强度光照下恢复6小时。本研究详细描述了利用原生质体成功进行雨生红球藻转化的过程，并使这一重要藻种的基因操作变得更加方便。 

原文链接：Establishment and optimization of PEGmediated protoplast transformation in the microalgae Haematococcus pluvialis

https://doi.org/10.1007/s10811-022-02718-x